保存温度：室温 （Room Temperature）

规格： 96 Tests/ 12 条八排管

 

● 产品说明：

本产品是冻干型的预混产品，其中使用了抗Taq抗体和LA PCR 法相结合的Hot Start Taq酶，可以进行高效的PCR扩增以及对温度的耐受性。八排管中每个管内已分装冻干的Hot Start Taq酶、Evagreen 染料，MgCl2、dNTP和PCR Buffer，只需加入灭菌蒸馏水、引物和模板即可进行PCR反应，可有效避免实验操作过程中引入的污染和减少反应组份添加的误差，同时也能在Evagreen 染料的存在下进行QPCR以及HRM溶解曲线的结果分析。本产品在室温保存性能稳定，运输和保存时不需要冷藏或冷冻条件。      

● 纯 度：

1. 将 1管的本产品溶解后，和 0.6 μg 的λ-Hind III 在 74℃下  反应 1 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。   

2. 将 1管的本产品溶解后，和 0.6 μg 的 supercoiled pBR322   DNA 在 74℃下反应 1 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。   

3. 将 1管的本产品溶解后，和 0.6 μg 的λ DNA 在 74℃下反  应 1 小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。      

● 用 途：Hot Start PCR法扩增DNA片段，可实时观察QPCR曲线以及HRM溶解曲线。     

● PCR扩增产物 ：

使用本制品扩增得到的PCR产物3’端几乎都附有一个“A”碱基，  可直接克隆于T-Vector中；经末端平滑化和磷酸化处理后可克隆于平滑末端载体中。      

● PCR反应性能：

1. 以人基因组DNA为模板，可以很好地扩增12 kb的DNA片段。   

2. 对94℃加热30秒的反应液和未加热反应液进行了PCR反应的比较，确认到抗体对Taq DNA polymerase活性的抑制作用。    

 

● HRM：

荧光染料可分为非饱和染料和饱和染料。饱和染料不会抑制PCR反应，所以能以高浓度存在于定量反应体系中，使双链PCR产物与染料结合程度达到饱和状态，从而在高温解链时不会产生“染料重排”现象。因此，饱和染料能够很好的区分扩增产物之间的单碱基差异。在饱和染料中进行PCR，再对产物进行熔解曲线分析，根据熔解曲线的变化情况判断产物中碱基差异的情况，这种研究方法称为高分辨率熔解（High resolution melting，HRM）分析。

● 操作流程：

【一般PCR反应体系为50 μl】   

将八排管上的密封膜揭开后，按下列组份配制反应液。反应液配制可在室温下进行。     

BORHEE™Taq HRM PCR Mix  1 tube

Template ＜ 100 ng

Primer 1 0.2～0.4 μM (final conc.) 

Primer 2 0.2～0.4 μM (final conc.) 

灭菌蒸馏水 up to 25 μl 

加入引物，模板和蒸馏水后，放置1min，使冻干的Master Mix完全溶解，振荡器上震荡混匀。反应液配制后，使用制品中附带的八排管盖盖紧盖子。

● PCR反应条件   需要在PCR前，95度3min激活Hot Start酶。

● 注意事项：

HRM对仪器和软件的要求较高，请于实验前确认仪器及当前软件版本是否适用于HRM分析。目前市面上常见的荧光定量PCR仪器中：ABI 7500Fast/7900HT/7900Fast/StepOne/StepOnePlus、Bio-rad CFX96/CFX384，Roche LightCycler 480、Qiagen Rotor-Gene 6000/Rotor-Gene Q等仪器配合专用软件可进行HRM实验。